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      熒光顯微鏡使用注意事項

       熒光顯微鏡是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,使之受激發后而產生長波長的熒光,然后觀察。熒光顯微鏡廣泛應用于生物,醫學等領域。


      1 熒光顯微鏡一般分為透射和落射式兩種類型。


       a.
      透射式:激發光來自被檢物體的下方,聚光鏡為暗視野聚光鏡,使激發光不進入物鏡,而使熒光進入物鏡。它在低倍情況下明亮,而高倍則暗,在油浸和調中時,較難操作,尤以低倍的照明范圍難于確定,但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。


       b.
      落射式:透射式目前幾乎被淘汰,新型的熒光顯微鏡多為落射式,光源來自被檢物體的上方,在光路中具有分光鏡,所以對透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用,不僅便于操作,而且從低倍到高倍,可以實現整個視場的均勻照明。

      FR-2L三目落射熒光顯微鏡
      2 熒光鏡檢術的注意事項


      a.
      激發光長時間的照射,會發生熒光的衰減和淬滅現象,因此盡可能縮短觀察時間,暫時不觀察時,應用擋板遮蓋激發光。


      b.
      作油鏡觀察時,應用"無熒光油"。


      c.
      熒光幾乎都較弱,應在較暗的室內進行。


      d.
      電源最好裝穩壓器,否則電壓不穩不僅會降低汞燈的壽命,也會影響鏡檢的效果。


        熒光拍攝通常使用制冷CCD,因為制冷CCD可以減少背景噪聲,對低熒光信號采集很有好處,特別是像單分子成像。采集強熒光信號不一定要制冷CCD,可使用黑白相機,彩色相機不適合熒光采集,因為其敏感度低、分辨率也低,除非熒光信號很高,對分辨率要求不高,才適合用彩色相機。

       

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